RNase概念

核糖核酸酶(Ribonuclesae，RNase)是一类催化RNA降解为小片段的核酸酶。RNase 家族包括RNase A、RNase B、RNase C、RNase H、S-RNase、RNase P、RNase T等。其中，RNaseA是一种有广泛应用的核酸内切酶，RNase A在嘧啶核苷酸残基C和U的3'端处高效且专一地催化单链RNA链骨架上的磷酸二酯键的裂开，形成具有2'，3'-环磷酸衍生物的寡聚核苷酸。

RNase污染的危害

核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶(DNase)类似，广泛存在于实验环境，从研发阶段的实验操作、实验室环境，到生产阶段的商品化试剂、生化制剂等，都极易发生RNase污染，因此，对核糖核酸酶活性的监测是一个常规质量控制(QC)步骤。

RNase检测方法

目前，常见的RNase残留检测方法主要包括放射性同位素法、分光光度法和荧光淬灭方法、电化学法等等，分光光度法存在检测灵敏度低、不适合微量核酸酶残留的活性检测的缺陷，电化学法则受限于仪器设备，相比之下，荧光探针法灵敏度高、检测速度快且能实现核酸酶活性的定量检测，因此被认为是核酸酶残留活性检测的最佳选择之一。1331.c.om.银河游戏自主研发基于荧光探针法的RNase残留检测试剂盒，可用于检测环境、耗材、原料中的RNase残留量，为相关质量检测提供重要的数据参考。

RNase残留检测原理

RNase底物是一种合成的RNA寡核苷酸探针，其一端具有FAM荧光基团(Fluorophore)又称供体(Donor)，另一端具有 TAMRA淬灭基团(Quencher)又称受体(Acceptor)。这两个基团的吸收光谱有一定的重叠，当这两个荧光基团间的距离合适时，荧光能量由供体向受体转移，导致供体荧光分子自身的荧光强度衰减。当该底物被RNase切割后，底物首尾两端分离，两个基团分开，FAM的荧光不再被TAMRA淬灭，即可检测到FAM的荧光，荧光信号的增加速率与酶的数量和活性呈正相关。使用荧光酶标仪在ex/em =490/520nm(RNase)的波长下测量，可以确定样品是否有RNase污染，这样通过荧光检测就可以非常灵敏地检测核酸酶的酶活性。

图1 1331.c.om.银河RNase核酸酶残留检测试剂盒检测原理图

经验证，该试剂灵敏度可达0.078pg。

图2. 1331.c.om.银河RNase残留检测试剂盒灵敏度检测效果

经验证RNase A在0-10pg范围内有良好的线性关系，R²>0.99，可以通过设置标准曲线，计算出样品中RNase A的活性。本试剂盒应用于RNase A酶的检测结果参考图4。

图3. 60分钟内本试剂盒检测不同量的RNase A的荧光强度变化图

图4. 1331.c.om.银河RNase 残留检测试剂盒对RNase A标准品的检测效果